蛋白掛柱后洗脫不下來主要是因?yàn)榈鞍缀椭咏Y(jié)合能力太強(qiáng)或者洗脫條件太溫和，我們可以從以下幾方面考慮解決問題。

1、洗脫條件太溫和：重新摸索洗脫條件，增加緩沖液中咪唑濃度或者適當(dāng)降低緩沖液pH以確定最佳的洗脫條件或者更、換緩沖液的成分（換成tris-HCl緩沖液）。

2、蛋白在柱子中沉淀：適當(dāng)降低上樣量或蛋白濃度，用咪唑線性洗脫。使用添加劑或者改變NaCl的濃度，或者在變性的條件下洗脫（加4-8M的尿素或者4-6M的鹽酸胍）。

3、非特異性的疏水或者其他作用：在洗脫液中加非離子的添加劑（例如0.2%的Triton X-100）或者增加NaCl的濃度。

4、蛋白和柱子接觸時(shí)間過長：可以減少蛋白和柱子的接觸時(shí)間。